Микробиология

Химиотерапия — специфическое антимикробное, антипаразитарное лечение при помощи химических веществ. Эти вещества обладают важнейшим свойством — избирательностью действия против болезнетворных микроорганизмов в условиях макроорганизма.

ВНИМАНИЕ! Работа на этой странице представлена для Вашего ознакомления в текстовом (сокращенном) виде. Для того, чтобы получить полностью оформленную работу в формате Word, со всеми сносками, таблицами, рисунками (вместо pic), графиками, приложениями, списком литературы и т.д., необходимо скачать работу.

Содержание

1. Понятие о химиотерапии и антибиотиках. Работы П. Эрлиха, Г.Домагка, А. Флеминга, Г. Флори и Э. Чейна 3
2. Ультраструктура бактериальной клетки: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, рибосомы, нуклеоид, их функции. Протопласты. Сферопласты. L - формы 6
3. Особенности морфологии хламидий, микоплазм. Методы их изучения 9
4. Дифференциально-диагностические среды для культивирования бактерий. Приготовление, стерилизация, использование 15
5. Внехромосомные факторы наследственности 18
6. Стерилизация в условиях аптеки. Цели, методы, режимы. Консервация медицинских препаратов 21
7. Микробиологическое исследование лекарственного сырья и готовых препаратов на стерильность и микробиологическую чистоту. Определение ОМЧ и СПМ 24
8. Учение об инфекции: основные эпидемиологические понятия: источник инфекции, механизм передачи, факторы передачи, пути передачи. Бактерионосительство 26
9. Реакция преципитации. Ингредиенты. Способы постановки. Разновидности. Практическое использование 29
10. Биологические препараты, полученные методом генной инженерии 31
Список использованной литературы 33

1. Понятие о химиотерапии и антибиотиках. Работы П. Эрлиха, Г.Домагка, А. Флеминга, Г. Флори и Э. Чейна

Химиотерапия - специфическое антимикробное, антипаразитарное лечение при помощи химических веществ. Эти вещества обладают важнейшим свойством - избирательностью действия против болезнетворных микроорганизмов в условиях макроорганизма.
Антибиотики - химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами, животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты, которые обладают избирательной способностью угнетать и задерживать рост микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.
По спектру действия антибиотики делят на пять групп в зависимости от того, на какие микроорганизмы они оказывают воздействие. Кроме того, существуют противоопухолевые антибиотики, продуцентами которых также являются актиномицеты. Каждая из этих групп включает две подгруппы: антибиотики широкого и узкого спектра действия.
В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
- антибиотики, нарушающие синтез клеточной стенки. К этой группе относятся, например, β-лактамы. Препараты этой группы характеризуются самой высокой избирательностью действия: они убивают бактерии и не оказывают влияния на клетки микроорганизма, так как последние не имеют главного компонента клеточной стенки бактерий - пептидогликана. В связи с этим β-лактамные антибиотики являются наименее токсичными для макроорганизма;
- антибиотики, нарушающие молекулярную организацию и синтез клеточных мембран. Примерами подобных препаратов являются полимиксины, полиены;
- антибиотики, нарушающие синтез белка; это наиболее многочисленная группа препаратов. Представителями этой группы являются аминогликозиды, тетрациклины, макроли-ды, левомицетин, вызывающие нарушение синтеза белка на разных уровнях;
- антибиотики - ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот. Например, хинолоны нарушают синтез ДНК, рифампицин - синтез РНК;
- антибиотики, подавляющие синтез пуринов и аминокислот. К этой группе относятся, например, сульфаниламиды.
К началу XX века органическая химия и методы химического синтеза достигли такого уровня, что химики уверенно перестраивали молекулы органических соединений и могли синтезировать сложную молекулу по заданной формуле.
Немецкий ученый П. Эрлих – один из основоположников химиотерапии – был убежден, что, изменяя структуру молекулы, можно найти такие соединения, которые будут специфически влиять только на клетки возбудителей инфекционных болезней, легко проникая в них и действуя достаточно быстро.
П. Эрлих проявил исключительное упорство в трудной работе по исследованию ряда мышьяковистых соединений. Было синтезировано и изучено более шестисот соединений, прежде чем удалось получить препарат под номером 606 (сальварсан), обладающий высокой лечебной активностью.
Это было в 1909 году, а в 1912 году в лаборатории П. Эрлиха синтезировали вещество, имевшее номер 914 (неосальварсан), оказавшееся еще более действенным и менее токсичным «Волшебными пулями» называли молекулы сальварсанов – они, попадая в ткани организма, поражали только микробов. Это было громадным достижением и открывало важнейшие перспективы перед новой наукой – химиотерапией.
Число побежденных болезней долгое время оставалось очень небольшим, и острые инфекции продолжали угрожать человеку.
Лишь в 1932 году ученик П. Эрлиха химик Г. Домагк, изучая соединения, содержащие два связанных атома азота -N=N- (диазосоединения), обнаружил, что одно из них (его позднее назвали красным стрептоцидом) успешно борется со стрептококковыми инфекциями. Опыты шли на мышах. Но однажды сын Г. Домагка, случайно уколов руку, заболел тяжелым стрептококковым заражением крови. Г. Домагк рискнул ввести ребенку красный стрептоцид и спас своего сына от грозившей ему неизбежной смерти.
После этого клинические испытания стали проводить быстрее и стрептоцид начал свое победное шествие по больницам и клиникам. Красная форма лекарства состояла из двух компонентов, неактивен был только один из них – белый стрептоцид.
Это нелегкая работа, но изучение этого класса соединений было весьма плодо-творным. Удалось создать препараты, способные подавлять развитие туберкулезных бактерий; в 1946 и 1951 гг. группа, возглавляемая Г. Домагком, получила параамино-салициловую кислоту (ПАСК) и изониазид, применение которых в последующие годы резко снизило смертность от туберкулеза.
Первооткрывателем антибиотиков является английский ученый Флеминг, который в 1929 году описал бактерицидное действие колоний грибка Пенициллина на колонии бактерий разраставшихся по соседству с грибком.
Позже учёный решил, что заниматься пенициллином не стоит – по его мнению, препарат был бесперспективен. Однако его коллега биохимик Э. Чейн был иного мнения. В 1935 году в лаборатории Оксфорда он занимается изучением действия пенициллина, предварительно проштудировав результаты экспериментов Флеминга. После серии неудач, Чейну удается соорудить установку по получению устойчивого экстракта «пенициллюма».
Результат превосходит все ожидания. Пенициллин излечивает множество опасных инфекций. Чейн осознает значение этого открытия и предлагает Флори запатентовать лекарство.
Открытие антибиотиков, без преувеличения, можно назвать одним из величайших достижений медицины прошлого века.

2. Ультраструктура бактериальной клетки: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, рибосомы, нуклеоид, их функции. Протопласты. Сферопласты. L - формы

Бактерии имеют строение, характерное для большинства прокариот. Некоторые ученые предлагают использовать понятие «бактериальная клетка». В структуре бактериальной клетки выделяют основные и временные компоненты.
Клеточная стенка - это внешняя оболочка клетки толщиной 10-100 нм. У прокариотических организмов она выполняет ряд важных функций: служит внешним каркасом клетки, защищающим ее от повреждающих факторов окружающей среды, придает клетке форму, участвует в обмене веществ (метаболизме), у патогенных бактерий содержит токсические вещества.
Основным компонентом клеточной стенки всех бактерий является муреин (лат. murus - стенка). Это полимер, имеющий два типа связей (гликозидные и пептидные), соединяющих мономерные субъединицы муреина в сетчатую структуру.
Цитоплазматическая мембрана - неотъемлемая часть любой бактериальной клетки. Разрушение плазмолеммы неизбежно приводит к гибели микроорганизма. Химический состав цитоплазматической мембраны представлен на 75 % белками и на 15 % липидами.
Структурно цитоплазматическая мембрана состоит из трех слоев: двух белковых и между ними идет один липидный. В процессе роста клетки цитоплазматическая мембрана способна образовывать выпячивания, или инвагинации, которые называются мезосомами. Назначение мезосом окончательно не выяснено.
Цитоплазматическая мембрана - полифункциональная структура. Она выполняет роль осмотического барьера клетки, благодаря своей полупроницаемости она способна контролировать поступление питательных веществ в клетку, а также является местом протекания различных реакций.
Цитоплазма состоит из цитозоля, в котором растворены РНК, ферменты, продукты обмена веществ и структурных элементов (рибосом, включений нуклеоида).
Рибосомы - одна из главных составляющих цитоплазмы у прокариот. Основная функция рибосом - синтез белка. Как уже упоминалось, клетка прокариот имеет константу седиментации - 7O S (скорость осаждения частицы при центрифугировании). Структурно рибосомы делятся на 2 субъединицы: 3O S и 5O S. Каждая субъединица состоит из РНК и белка. Количество рибосом в одной бактериальной клетке может достигать 50 тыс. Поскольку для прокариот характерна ассоциация процессов транскрипции и трансмиссии, то происходит агрегация рибосом в комплексные структуры - полисомы.
Нуклеоид. Ядро у прокариот называется нуклеоидом. Он представляет собой двойную нить ДНК, замкнутую в кольцо, которая в развернутом и деспирализованном виде имеет длину около 1,4 нм, т. е. в 1000 раз превосходит длину самой клетки. Кроме ДНК, в состав нуклеоида входят РНК-полимераза, собственно РНК, основные белки и липиды.
Отличительная особенность нуклеоида прокариот от ядра у эукариотических клеток - отсутствие ядерной оболочки. Однако в большинстве случаев у бактерий обнаруживается уплотнение цитоплазмы, соответствующее центральной ядерной зоне, где сосредоточены связанные с хромосомами продукты обмена веществ.
Протопластами называют клетки округлой формы, полностью лишенные остатков клеточной стенки и окруженные только цитоплазматической мембраной. Их образование характерно чаще для грамположительных бактерий. Сферопласты отличаются от протопластов тем, что у них сохраняются остатки клеточной стенки, а образуются они преимущественно из клеток грамотрицательных бактерий.
Протопласты и сферопласты можно получить в лабораторных условиях, обрабатывая клетки бактерий лизоцимом (син. N-ацетилмурамидаза) разрушающим муреин; антибиотиками пенициллинового ряда (пенициллин, ампициллин, карбенициллин и др.) или циклосерином, подавляющими интез муреина. Протопласты и сферопласты можно получить и с помощью других ферментов, которые разрушают пептидные связи, участвующие в поперечной сшивке гетерополимерных цепей муреина. Протопласты и сферопласты в 3–10 раз крупнее исходных клеток
бактерий. В гипертонических или изотонических условиях они осуществляют обмен веществ, характерный для исходных клеток, т. е. сохраняют
дыхательную активность, синтезируют необходимые биополимеры, образуют эндоспоры, если процесс споруляции уже был инициирован.
Бактерии, частично или полностью лишенные клеточной стенки, но
сохранившие способность к развитию, принято называть L-формами.
Буква L – первая буква названия Листеровского института в Лондоне,
где впервые обратили внимание на развитие морфологически весьма необычных клеток в культуре бактерий Streptococcus moniliformis, выделенной
из жидкости уха крысы.
L – формы образуются в результате несбалансированного роста нормальных бактериальных клеток в длину и толщину и поэтому плеоморфные. В культурах L-форм обнаруживаются клетки размером 0,2–50 мкм.
Они шаровидные, нитевидные, присутствуют и бесструктурные массы. L-формы проходят через бактериальные фильтры и легко разрушаются при механических воздействиях.
В отличие от протопластов и сферопластов, клетки L-форм имеют
хорошо развитую систему внутрицитоплазматических мембран, т. е. у
них содержатся мезосомы, а в отличие от нормальных клеток L-формы
часто содержат крупные вакуоли.
Исследования L-форм представляют существенный интерес для
медицинской микробиологии, поскольку в таком состоянии в организме человека и животных могут сохраняться патогенные бактерии.

3. Особенности морфологии хламидий, микоплазм. Методы их изучения

Первые сведения о хламидиях появились в 1907 г., когда Провачек обнаружил элементарные тельца в эпителии конъюнктивы больных трахомой и вместе с Хальберстадтером предложили название семейству этих микробов Chlamydozoa. Основанием для этого термина послужило наличие вокруг элементарных телец микроорганизмов матрикса (греческое Chlamys – мантия, матрикс). В 1934 г. открыты возбудитель орнитоза и сходство его жизненного цикла с возбудителем трахомы (Bedson Meyer), названный первоначально Бедсонией, а затем переименованный в Chlamydia psittaci. Долгое время считали хламидии вирусами. Однако выяснение морфологии, цитологии, химической структуры и метаболизма этих микробов позволило установить, что они являются бактериями.
По морфологическим признакам (наличие клеточной стенки, ядра с полным набором нуклеиновых кислот, рибосом и др.), биохимическому составу, характеру размножения (деления вегетативных форм), чувствительности к антибиотикам хламидии сходны с бактериями. Однако сравнительно небольшие их размеры, уникальный механизм внутриклеточного развития, неспособность к самостоятельному синтезу необходимой для существования микроба АТФ и использование для этих целей биоэнергетических структур клеток макроорганизма, существование в форме мелких (спорообразных) элементарных телец, преодолевающих бактериальные фильтры, неспособность роста на искусственных питательных средах и некоторые другие отличают их от классических бактерий. Размеры хламидий меньше, чем у бактерий, но больше, чем у вирусов. Классификация хламидий, вызывающих болезни человека представлена в таблице.
В макроорганизме хламидии существуют в основном в форме элементарных и ретикулярных телец – шарообразных грамотрицательных микроорганизмов. Элементарные тельца представляют собою зрелые особи микроба, адаптированные к внеклеточному существованию (располагаются внеклеточно). Они имеют диаметр 200-300 нм, красятся краской Романовского-Гимза в розово-фиолетовый цвет и обладают высокой степенью инфекциозности. Наличие у элементарных телец тропности к клеткам цилиндрического и переходного эпителия может приводить к инвазированию его.
Хламидии высокочувствительны к тетрациклинам, макролидам, рифампицинам и фторхинолонам. Пенициллины и цефалоспорины оказывают на них статическое действие и способствуют развитию L-формы микроба, способной в последующем подвергаться реверсии в элементарные тельца.
Инфицирование людей хламидиями происходит при попадании микробов на их слизистые оболочки. Развивающийся инфекционный процесс протекает в первично или вторично латентной или в манифестной формах.
Клеточный цикл развития хламидий имеет две основных формы - элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная форма и ретикулярные тельца (РТ) - вегетативная форма. Сферические ЭТ значительно меньше размерами (менее 300 нм в диаметре), имеют более жестную электронно- плотную структуру, метаболически мало активны, адаптированы к кратковременному внеклеточному существованию.
С учетом многообразия клинических проявлений и необходимостью дифференциации различных клинических форм хламидиозов (прежде всего генитальных и экстрагенитальных) особое значение приобретает лабораторная диагностика.
Золотой стандарт - метод культивирования в культурах клеток применяется очень редко в связи с трудоемкостью и длительностью культивирования, необходимостью работы с инфекционным материалом, этот метод по чувствительности уступает ПЦР, требует быстрой доставки материала для исследования.
Применяемые лабораторные методы можно разделить на две основные группы - методы выявления антител и методы выявления антигенов.
Методы выявления антител наиболее эффективны при генерализованных формах хламидиозов, сопровождающихся выработкой антител в высоких титрах (орнитоз), и мало эффективны при локальных (особенно хронических) формах (урогенитальные хламидиозы). Большинство методов выявляет антитела к группоспецифическому липополисахариду хламидий, что не позволяет определить вид хламидий. Среди используемых методов:
- РСК - достаточно специфичный, но мало чувствительный метод;
- РНГА - более эффективный метод для диагностики текущего инфекционного заболевания;
- ИФА - наиболее чувствительный метод серологической диагностики.
- РНИФ - обладает наибольшей степенью видоспецифичности.
Методы выявления возбудителя, его ДНК и антигенов.
1. Цитологические методы с окраской мазков по Романовскому - Гимзе и другими методами мало чувствительны и специфичны, имеют преимущественно историческое значение.
2. Метод флюоресцирующих антител (МФА) с моноклональными антителами (МКА) к группоспецифическому липополисахариду хламидий - наиболее распространенный, чувствительный и специфичный метод, позволяет выявлять локализацию возбудителя (урогенитальные мазки), морфологию (характер гранул, преобладание РТ или ЭТ). Метод требует высокой квалификации микроскописта и качества мазка - отпечатка ( достаточное количество клеток с учетом внутриклеточного расположения возбудителя).
3. ИФА для выявления антигена применяется относительно реже, требует большого количества материала (соскоб), связана с получением суспензии и опасностью инфицирования персонала.
4. ПЦР для выявления ДНК хламидий - наиболее чувствительный метод. Однако и при нем возможны ложноположительные (при недостаточной чистоте работы - при контаминации) и ложноотрицательные (наличие в пробах материала ингибиторов Tag - полимеразы) результаты.
Недостатки чувствительных методов выявления антигенов возбудителя - возможность получения положительных результатов даже через 1 - 1,5 месяца после излечения. Нужна полная замена эпителия слизистой, содержащего поверхностные антигены разрушенных хламидий, для получения отрицательных результатов. Особенно это относится к ИФА, ПЦР, для МФА - в меньшей степени (этот метод позволяет оценить морфологию включений хламидий).
Микоплазмы - самые мелкие прокариотические микроорганизмы, не имеющие клеточной стенки (это придает им сходство с L - формами бактерий) и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Способность персистировать на мембранах клеток связана с наличием сходства структуры и состава цитоплазматической мембраны микоплазм с мембранами клеток эукариот и использовании микоплазмами их компонентов (прежде всего холестерина и фосфолипидов) для построения собственных структур. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку.
Микоплазмы прихотливы к условиям культивирования. В составе сред необходимы холестерин и стерины, нативные сыворотки, витамины, соли. Основным источником энергии являются углеводы (особенно глюкоза) или аминокислоты (аргинин). Для усиления восстановительных свойств сред добавляют L- цистеин.
Микоплазмы характеризуются выраженной гетерогенностью и изменчивостью антигенной структуры (антигенный полиморфизм). Известно 16 серотипов U.urealyticum, разделенных на серогруппы А и В. Степень гомологии серотипов существенно отличается. Часто выделяют от больных смешанные культуры различных серотипов. Выделяют биовары уреаплазм, отличающиеся по вирулентности и строению гена основного фермента - уреазы. Аналогичная динамичность и гетерогенность антигенной структуры и наличие различных сероваров характерна и для различных видов классических микоплазм. По биохимическим и в определенной мере антигенным свойствам среди микоплазм имеются виды - двойники. Среди антигенов выделяют белки - адгезины, фосфо - и гликолипиды, полисахаридные компоненты.
Лабораторная диагностика. Наиболее оптимальна культуральная (бактериологическая) диагностика с использованием жидких и плотных питательных сред, особенно в сочетании с антибиотикограммой и определением титра микоплазм (уреаплазм) в нативных образцах. Преимущества этого подхода: быстрота (для уреаплазм 1-2 суток, для микоплазм - до 3 суток), простота (цветной пробирочный тест), достоверность (селективность сред, учет биохимизма возбудителей), возможность определения конценрации (титр 10000 цветообразующих единиц - ЦОЭ имеет диагностическое значение) и чувствительности к различным препаратам на основе антибиотикограммы (повышает эффективность лечения), возможность достоверного контроля эффективности лечения (растут только жизнеспособные микоплазмы).
Наиболее чувствительна ПЦР - диагностика. Однако: возможны ложно - положительные и ложно - отрицательные результаты, длительность выявления положительных результатов контроля излеченности, невозможность определения титра микоплазм (не разработаны количественные методики ) и чувствительности к препаратам.
Люминесцентная диагностика дает неудовлетворительные результаты чаще, чем при выявлении хламидий. Это связано с малыми линейными размерами возбудителей, серологической гетерогенностью и антигенной изменчивостью, возможностью перекрестных реакций между различными видами, наличием диагностических препаратов только для выявления уреаплазм и M.hominis.
Серологические методы многочисленны, однако коммерческие препараты отсутствуют, существуют проблемы в интерпретации результатов.
Лечение должно быть основано на подборе чувствительных антибиотиков (чаще применяют макролиды, тетрациклины - доксициклин) и бактериологическом контроле эффективности лечения. Имеются устойчивые к тетрациклинам, макролидам и другим антибиотикам штаммы (связано с наличием плазмид устойчивости). У микоплазм имеются специфические вирусы, в т.ч. бактериофаги. В лечебных и диагностических целях они до настоящего времени не используются.
Специфическая профилактика на сегодняшний момент не разработана.

4. Дифференциально-диагностические среды для культивирования бактерий. Приготовление, стерилизация, использование

Дифференциально-диагностические среды - специальные смеси питательных веществ, применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их свойств. При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов. Одни из них способны расщеплять белки, другие -углеводы, третьи - вызывать реакции окисления и восстановления и т. д. Благодаря действию ферментов в дифференциально-диагностической среде происходят соответствующие изменения.
Дифференциально-диагностические среды можно разделить на четыре основные группы.
1. Среды, содержащие белок и выявляющие способность микробов расщеплять белки (протеолитические Свойства): мясо-пептонная желатина «столбиком», свернутая лошадиная или бычья сыворотка, молоко, кровяной агар. При посеве бактерий проколом в мясо-пептонную желатину, «столбиком» в случае расщепления белка наблюдают разжижение среды. При посеве на среду со свернутой сывороткой расщепление белка определяют по разжижению среды и образованию углублений на ее поверхности. Расщепление микробом молока выявляется просветлением или растворением первоначально свернувшегося молока. Наличие гемолитической активности исследуемой культуры проверяют посевом ее в чашку Петри на специальный кровяной агар.
2. Среды для выявления способности микробов расщеплять углеводы и высокоатомные спирты (Эндо среда, Левина среда, Расселла среда, Дригальского - Конради среда, Рапопорт - Вайнтрауба среда, Шустовой среда). Для выявления этих свойств микроорганизмов применяют также «пестрый» ряд, т. е. серию пробирок, содержащих питательные среды, включающие различные углеводы, многоатомные спирты и индикатор. В качестве индикаторов пользуются лакмусовой настойкой или бромтимоловым синим. Разложение какого-либо из углеводов с образованием кислоты выявляют по изменению цвета индикатора, образование газа- по заполнению газом и всплыванию специального стеклянного поплавка в жидкой среде. Или применяют полужидкие Гисса среды (см.) с 0,5% агара с соответствующими сахарами и индикатором Андраде. После посева микроба на эти среды образование кислоты выявляют покраснением среды, а образование газа - по появлению его пузырьков в агаре или по разрыву и сдвигу вверх агарового столбика. К дифференциально-диагностическим средам второй группы относят также крахмальный агар, служащий для определения способности микробов расщеплять крахмал, среду Кларка и др.
3. Среды, на которых выявляется способность микробов обесцвечивать красители, добавленные к бульону: метиленовый синий, тионин, лакмус, индигокармин, нейтральный красный или другие (среда Ротбергера, среда Омелянского). К третьей группе относят также среды с нитратами, служащие для определения способности микробов восстанавливать соли азотной кислоты (нитраты) в соли азотистой кислоты (нитриты) и далее в аммиак или свободный азот.
4. Среды, выявляющие способность микробов усваивать вещества, которые не усваиваются другими микробами, например среда с лимоннокислым натрием (цитратный агар Симонса) для отличия кишечной палочки, которая лишена способности ассимилировать эту среду, от других бактерий кишечной группы или среда с олеиновокислым натрием для дифференциации дифтерийной палочки от ложно дифтерийной и дифтероидов (агар Энжеринга).
К дифференциально-диагностическим средам относят также среды для дифференциации анаэробов, теллуритовые среды для дифференциации дифтерийных бактерий, среды с мочевиной, щелочные среды (Дьедонне агар) для культивирования холерного вибриона.
В лабораторных условиях для приготовления, хранения и розлива питательных сред используют бактериальные пробирки, плоскодонные колбы, флаконы и пр.
Для пластинчатых твердых сред применяют чашки Петри. В массовом микробиологическом производстве бактериальные культуры выращивают в металлических котлах (реакторы) большой емкости (500-1000 л).
В посуде, используемой для питательной среды, нельзя хранить дезинфицирующие вещества, антибиотики, так как малейшие их следы делают среду непригодной для выращивания микробов. Перед употреблением посуду тщательно моют и высушивают. Новую посуду предварительно кипятят в 1 % растворе соляной кислоты и промывают в проточной дистиллированной воде. Питательные среды обычно должны быть прозрачными, поэтому их до употребления фильтруют или отстаивают. Отстоявшиеся расплавленные агаровые среды фильтруют через ватно-марлевый фильтр (при фильтровании через вату качество среды может снизиться за счет адсорбции на ней соединений среды, стимулирующих рост микроба). Жидкие среды фильтруют через фильтровальную бумагу или полотно. Если агар после фильтрования или отстаивания остается мутным, то его осветляют, добавляя яичный белок или сыворотку из расчета на 1 л среды одно куриное яйцо или 20-25 мл сыворотки. Добавленные белки свертываются, адсорбируют взвешенные частицы и, оседая, просветляют среду. Готовые питательные среды разливают в соответствующую стерильную посуду и стерилизуют.
Стерилизация - весьма ответственный этап приготовления. Режим ее не должен изменять свойства сред. Наиболее распространена и эффективна стерилизация при помощи высокой температуры в автоклавах под давлением или текучим паром. Обычно стерилизуют в автоклаве при 1 атм. (120,6°) в течение 15-30 мин., в отдельных случаях и при объемах среды, превышающих 1 л, - в течение 1-1,5 час. Указанным способом пользуются для стерилизации сред, не содержащих углеводы и нативные белки или другие термолабильные субстанции. При наличии в среде термолабильных субстанций пользуются бактериальными фильтрами или дробной стерилизацией. При стерилизации бульонных сред или сред, содержащих другие органические источники питания, возможно изменение рН в кислую сторону на 0,1-0,2.
Готовые питательные среды хранят в холодном и темном помещении с достаточной влажностью. Длительно хранить нежелательно: плотные среды подсыхают, а в жидких возможно выпадение осадков.
Для стандартизации условий культивирования микробов и облегчения лабораторных работ применяют сухие - гигроскопические порошки, растворяющиеся в воде. Перед употреблением такие растворяют в дистиллированной воде и затем стерилизуют.

5. Внехромосомные факторы наследственности

К внехромомсомным факторам наследственности относят плазмиды и эписомы, которые располагаются в цитоплазме клетки. Плазмиды не способны встраиваться в нуклеотид бактерии, они имеют собственную ДНК, которая может самостоятельно реплицироваться. В противоположность плазмидам, эписомы встраиваются в нуклеотид бактерии и функционируют вместе с ним.
Плазмиды, не зависимо от нуклеоида, обеспечивают способность к коньюгации, устойчивость к антибиотикам и другим веществам. Установлено, что наличие плазмид в клетке не обязательно, но в тоже время их может быть несколько. Плазмиды подразделяют на коньюгативные (трансмисивные) и неконьюгативные (на трансмиссивные). Первые – придают клетке свойства генетического донора, детерминируют перенос генетического материала от клетки донора к клетке реципиенту, вторые – не придают клетке свойств генетического донора, не могут передаваться к клетке реципиенту без наличия факторов переноса.
Различают следующие виды плазмид: Соl-фактор – колициногенный фактор, F-фактор – фактор фертильности, R-фактор – фактор устойчивости к лекарственным веществам, плазмиды биодеградации, плазмиды, кодирующие факторы вирулентности у микроорганизмов (Ent, Hly, Sal, K и т. д.)
Col-факторы – это плазмиды, контролирующие синтез бактериоцинов, обладающих способностью подавлять развитие филогенетических родственных бактерий. Название бактериоциногенов присваивают с учетом вида микроорганизмов их продуцирующих. В настоящее время известно, что практически почти все патогенные бактерии продуцируют бактериоцины.
Бактериоцины кишечной палочки называют колицины, стаффилококка – стаффилоцины, пневмококка – пневмоцины, вибриона – вибриоцины и т. д.. Лучше других бактериоцинов изучены колицины. Культуры кишечной палочки, продуцирующие колицины, называют колициногенами, а чувствительные к ним – колициночуствительными. Колицины – вещества белковой природы. Они обладают способностью ингибировать синтез ДНК, РНК, белка, вызывать гибель клетки не нарушая ее целостности. Колицины обладают летальным признаком, т. е. после их продукции бактериальная клетка может погибнуть. Колицины функционируют аналогично антибиотикам с узким спектром действия, обладают свойствами эндодезоксирибонуклеаз.
Бактериальные клетки, выделяющие бактерицины, устойчивы к действию гомологичных бактерицинов окружающей среды.
F-фактор может функционировать автономно и может быть в интегрированном, как эписома, состоянии. Этот фактор представляет собой кольцевую ДНК длиной 30-32 нм, молекула которой детерминирует перенос генетического материала из клетки донора в клетку реципиента, синтез половых ворсинок, синтез ферментов, способность к автономной репликации и т. д.
R-фактор генетическая структура, обеспечивающая устойчивость к лекарственным препаратам. Эта структура несет гены лекарственной устойчивости (ч-гены). Устойчивость к одному или нескольким лекарственным препаратам (антибиотикам) осуществляется за счет оперонов и может быть передана путем коньюгации и трансдукции.
Плазмиды биодеградации ответственны за использование органических соединений бактериями в качестве источников углерода и энергии, за утилизацию ряда сахаров, образование протеолитических ферментов.
Ent-плазмиды кодируют образование энтеротоксинов у энтеробактерий, Hly-плазмида – синтез гемолизинов у энтеропатогенных микроорганизмов и стрептококков. Sal-плазмида контролирует у псевдомонад использование бактериями салицилатов благодаря выработке предназначенного для этой цели фермента.
У микроорганизмов наличествуют подвижные генетические элементы – последовательности и транспозоны, которые могут кодировать свою собственную транспозицию (перенос) от одного нуклеоида к другому или же между нуклеоидом и плазмидами. Такой перенос обусловлен способностью подвижных генетических элементов определять синтез ферментов транспозиции и рекомбинации – транспозаз.
Инсертиционные (вставочные) последовательности (is-элементы, от английского insertion – вставка, sequence – последовательность) обладают следующими свойствами. Они способны перемещаться по геному, реплицируя при этом is-элемент. В процессе репликации первичный экземпляр остается на месте, а копия встраивается в мишень, почти не обладающей специфичностью. Функции, обеспечивающие способность к перемещению (транспозиции) закодированы в самом is-элементе. Транспозиция весьма редкое событие, которое происходит реже, чем спонтанные мутации. В местах смежных по отношению к инсерции возникают делеции и инверсии бактериальных геномов. Встроенная инсерция может либо активировать транскрипцию соседних генов, либо ингибировать их активность. Is-элементы обеспечивают взаимодействие между нуклеоидом, плазмидами и эписомами. В свободном состоянии is-последовательности не обнаружены.
Транспозоны состоят из 2500-20000 и более пар нуклеотидов и могут быть в свободном состоянии в виде кольцевой молекулы, которая обладает способностью перемещаться из хромосомы в плазмиды и наоборот, мигрируя с репликона на репликон. Некоторые умеренные фаги, например Ми-бактериофаг E. Coli, устроены аналогично и представляют собой гигантские транспозоны. Транспозоны могут быть носителями информации отвечающей за продуцирование токсинов и ферментов, ингибирующих антибиотики.

6. Стерилизация в условиях аптеки. Цели, методы, режимы. Консервация медицинских препаратов

Стерилизация - полное уничтожение в том или ином объекте живых м/о и их спор. Стерилизация имеет большое значение при изготовлении всех л/ф и особенно инъекционных. В данном случае следует стерилизовать посуду, вспомогательные материалы, растворители и готовый раствор. Таким образом, работа по изготовлению растворов для инъекций должна начинаться со стерилизации и стерилизацией заканчиваться. Стерилизация имеет большое значение при создании условий асептики, необходимой как при изготовлении л/ф для инъекций, так и не стерильных л/ф.
Методы стерилизации. Классификация.
В технологии лекарственных форм используют разные методы стерилизации:
1.Физические методы:
- термическая стерилизация: паровая и воздушная
- радиационная стерилизация
- стерилизация фильтрованием
2.Химические методы:
- газовая стерилизация
- стерилизация растворами
- термическая стерилизация
Воздушная стерилизация
Этот метод стерилизации осуществляется горячим воздухом в воздушных стерилизаторах при температуре 180 – 2000С. При этом погибают все формы м/о за счет пирогенетического разложения белковых веществ.
Паровая стерилизация
Выбор метода и продолжительность стерилизации зависят от объема пли массы стерилизуемого материала и его устойчивости к нагреванию. В результате стерилизации свойства стерилизуемых веществ не должны изменяться.
Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Осуществляется в различной конструкции автоклавах. Автоклав представляет собой герметически закрывающийся сосуд, состоящий из толстостенной стерилизационной камеры и кожуха. На автоклаве имеется предохранительный клапан, обеспечивающий выход пара при избыточном давлении, и манометр. При каждом автоклаве должны быть инструкция по его эксплуатации и уходу, а также паспорт котлонадзора.
Радиационный метод
Радиационный метод стерилизации может быть рекомендован для изделий из пластмасс, изделий одноразового использования в упаковке, перевязочных материалов, некоторых лекарственных средств и других видов медицинской продукции. Радиоактивная стерилизация является высокоэффективной для крупных производств.

Стерилизация ультрафиолетовой радиацией
Несмотря на то, что метод стерилизации УФ-радиацией не включен в ГФ XI, использование его имеет большое значение для создания условий асептики и стерилизации многих объектов. УФ-радиация является мощным стерилизующим фактором, способным убивать и вегетативные, и споровые формы микроорганизмов. В настоящее время ультрафиолетовая радиация широко используется в различных отраслях народного хозяйства для обеззараживания воздуха помещений, воды и других объектов. Использование их в аптеках имеет большое практическое значение и существенные преимущества по сравнению с применением дезинфицирующих веществ так как последние могут адсорбироваться лекарственными средствами приобретая резкие запахи.
Газовая стерилизация
Своеобразной химической стерилизацией является метод стерилизации газами и аэрозолями.
Для этого можно использовать газы: оксиды этилена и пропилена, оксиды (3-пропиллактона, полизтиленоксиды, смесь этилена оксида с углерода диоксидом или метилом бромистым и др.).
Известно несколько основных способов консервации водных растворов лекарственных средств. Все они, в первую очередь, направлены на подавление роста и развития бактерий, для которых эти растворы могут оказаться источником жизнедеятельности.
Одним из самых распространенных способов консервации является термическая обработка водных раcтворов лекарственных средств. Она эффективна против вегетативных форм бактерий. В то же время, некоторые спорообразующие бактерии устойчивы при 120oС, тогда как ряд биологически активных препаратов белковой природы при такой температуре дезактивируется уже за 20 минут.
Наиболее общим способом консервации водных растворов лекарственных средств является добавка в растворы бактерицидов, убивающих бактерии.
Изобретение процесса консервации значительно повысило качество лекарственных препаратов.

7. Микробиологическое исследование лекарственного сырья и готовых препаратов на стерильность и микробиологическую чистоту. Определение ОМЧ и СПМ

Существуют различные подходы к обеспечению надлежащего уровня микробной чистоты нестерильных лекарственных средств. Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьём, то для достижения требуемого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырьё. Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы. Предварительной деконтаминации можно достичь прессованием сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высоком давлении). На практике применяют четыре способа деконтаминации сырья и готовых лекарственных средств. Термический способ. Широко распространённый метод промышленной деконтаминации. Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм, для которых применяют прогревание до 60-70 °С горячим воздухом, инфракрасное и высокочастотное излучение. Химический способ. Более пригоден для стерилизации посуды, трубопроводов и прочих изделий из полимерных материалов. Стерилизующий агент - окись этилена или смесь окисиэтилена и бромистого метила (в соотношении 1:25). Для непосредственной деконтаминации лекарственных средств этот способ применяют ограничено, так как окись этилена взаимодействует с веществами, содержащими галогенные, гидроксильные и карбоксильные группы. УФ-облучение. Метод используют для обработки антибиотиков, витаминов, ферментов, гормонов и алкалоидов.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы (СПМ), по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде. Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специаль¬ных камер или электронным счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые от погибших бактерий; 2) посевом на питательные среды.
СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно оби¬тать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.
ОМЧ - общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (см 3 ) продукта. Для его определения используют метод кратных разведений.
Метод кратных разведений. При исследовании плотных субстратов навеску измельчают в гомогенизаторе или растирают в ступке с кварцевым песком и готовят исходную взвесь в разведении 1:10. Из полученной взвеси или исходного жидкого материала готовят ряд последующих разведений с таким расчетом, чтобы при посеве двух последних разведений на чашке Петри в агаре выросло от 50 до 300 колоний. Из последних двух разведений по 1 см 3 вносят в чашку и заливают 10-15 мл расплавленного и остуженного до 45 °С МПА. Чашки инкубируют при 37 °С 48 ч, подсчитывают количество выросших колоний. ОМЧ определяют с учетом разведения исследуемого материала.
Метод предельных разведений. Из исходного жидкого материала готовят ряд десятикратных разведений до тех пор, пока в последней пробирке можно будет предположить наличие одной бактериальной клетки. Посев делают в жидкую селективную среду с последующим выделением микроорганизмов на твердой питательной среде и изучением их характеристики.
За титр принимают, то наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена одна особь искомого микроорганизма.
С помощью указанных методов достигается микробиологическое исследование.

8. Учение об инфекции: основные эпидемиологические понятия: источник инфекции, механизм передачи, факторы передачи, пути передачи. Бактерионосительство

Инфекция - сумма биологических реакций, которыми макроорганизм отвечает на внедрение микробного (инфекционного) агента, вызывающего нарушение постоянства внутренней среды (гомеостаза).
Для каждой инфекционной болезни имеется свой путь передачи микроорганизмов, который сформировался в процессе эволюции и является основным способом сохранения возбудителя как вида.
Существуют три фазы перехода возбудителя из одного организма в другой:
1) выделение микробного агента из организма в окружающую среду;
2) нахождение возбудителя в окружающей среде;
3) проникновение инфекции в совершенно новый организм.
Механизм передачи инфекционных агентов осуществляется через эти три фазы, но может иметь свои особенности в зависимости от первичной локализации возбудителя. К примеру, при нахождении возбудителя в клетках слизистой верхних дыхательных путей его выделение осуществляется с выдыхаемым воздухом, в котором и находятся микробные агенты в составе аэрозолей (грипп, ОРВИ, ветряная оспа, коклюш, скарлатина). При локализации инфекции в клетках желудочно-кишечного тракта ее выделение возможно с испражнениями и рвотными массами (дизентерия, холера, сальмонеллез).
При нахождении возбудителя в кровеносном русле механизмом его передачи будут кровососущие насекомые (риккетсиозы, чума, туляремия, энцефалит). Контактный механизм – за счет локализации микробов на кожных покровах.
В зависимости от первичного нахождения возбудителя в организме человека различают четыре механизма передачи инфекции:
1) воздушно-капельный;
2) фекально-оральный (пищевой);
3) трансмиссионный;
4) контактно-бытовой.
Воздушно-капельный (пылевой, ингаляционный) – один из самых распространенных и быстрых способов передачи инфекционных болезней. Таким путем могут передаваться заболевания, вызываемые как вирусами, так и бактериями.
Фекально-оральный (пищевой) путь передачи реализуется при передаче кишечных инфекций, вызываемых как вирусами, так и бактериями. Факторами передачи при этом являются пищевые продукты, грязные руки, зараженная вода, мухи, разные бытовые предметы.
Контактно-бытовой механизм передачи осуществляется либо при непосредственном контакте (прямой), либо через зараженные предметы окружающей обстановки (непрямой контакт). В результате прямого контакта передаются возбудители дифтерии, туберкулеза, скарлатины, герпеса, чесотки, гельминты, бруцеллеза. При непрямом контакте через зараженные предметы, белье, игрушки, посуду осуществляется развитие шигеллеза, гельминтоза, брюшного тифа, в редких случаях – дифтерии, туберкулеза, скарлатины. Наиболее часто дети заражаются через загрязненные руки. При этом больной или бактерионоситель может загрязнять предметы обихода – посуду, игрушки, дверные ручки, перила и т. д. Здоровый ребенок, используя зараженные предметы, легко загрязняет свои руки и заносит инфекцию в рот.
Трансмиссивный путь передачи осуществляется при участии живого переносчика, зараженного возбудителем инфекционной болезни.
Механические (неспецифические) переносчики передают инфекцию в том же виде, в каком и получили ее. Например, у мух на лапках и теле присутствуют возбудители кишечных инфекций, вирус гепатита А, палочки брюшного тифа. Роль механического пути передачи в распространении заболеваний относительно невелика.
Внутриутробный (трансмиссионный) путь – такой, при котором происходит передача возбудителей от матери плоду через плаценту.
Бактерионосительство - носительство человеком возбудителей заразной болезни, нередко при отсутствии признаков заболевания. Длительное носительство часто поддерживается сопутствующими воспалительными заболеваниями (ангины, колиты,холециститы и др.), а также гельминтозами.
Выделяют три категории носителей: здоровые люди, реконвалесценты и иммунные. Здоровые носители (носительство без предшествующего заболевания) выделяют обычно возбудителей в течение короткого времени.
К числу здоровых носителей относят и людей, выделяющих возбудителя в последние дни инкубационного периода.
Носители-реконвалесценты выделяют возбудителя некоторое время после клинического выздоровления. Чаще такое носительство кратковременное. После некоторых инфекционных болезней носительство переболевших становится хроническим и продолжается 3-4 мес. (дифтерия) и даже 10 лет и более (брюшной тиф).
Иммунные носители - лица, не заболевшие вследствие перенесенного ранее заболевания или в результате эффективной иммунизации.
Носительство выявляют путем выделения возбудителя лабораторным методом.
Учитывая перемежающийся характер носительства (колебания в количестве выделяемых микробов), носителя можно признать свободным от патогенного микроба лишь в том случае, если два или три исследования, произведенных подряд одно за другим на протяжении нескольких дней, будут с отрицательным результатом.
Профилактика бактерионосительства достигается ранней госпитализацией больных, а следовательно, назначением ранней рациональной терапии, выпиской реконвалесцентов не ранее полного клинического выздоровления.
В целях профилактики массового распространения инфекции бактерионосителями работников пищевых предприятий, детских учреждений систематически обследуют на возможное бактерионосительство.
Эта профилактическая работа ведется на санитарно-эпидемиологических станциях.
Лечение бактерионосителей раньше обычно было малоэффективным.
В настоящее время применение антибиотиков и бактериофагов позволяет во многих случаях освобождать людей от носительства бактерий.

9. Реакция преципитации. Ингредиенты. Способы постановки. Разновидности. Практическое использование

Преципитация - реакция осаждения комплекса антигена (преципитиногена) и антитела (преципитина). Преципитация - один из иммунологических феноменов, позволяющих определить содержание антител в сыворотке крови больных или вакцинированных людей, а также в крови иммунизированных животных.
При использовании стандартных сывороток реакция преципитации может быть применена для титрования различных по происхождению растворимых антигенов.
При наиболее простой форме постановки реакции преципитации к ряду пробирок с постоянным количеством антигена добавляют подслаиванием исследуемую сыворотку в серии кратных разведений. После 30-60 мин. инкубации при комнатной температуре на границе двух жидкостей образуется кольцо помутнения - кольцепреципитация. Минимальное количество сыворотки, которое дает реакцию П., принимают за титр антисыворотки. При обратной постановке реакции со стандартной антисывороткой удается оценить относительную концентрацию антигена в различных биологических жидкостях.
При оценке значения реакции преципитации как диагностического метода необходимо учитывать, что в иммунных сыворотках могут присутствовать антитела, не обладающие свойствами преципитинов и, следовательно, не образующие преципитата при взаимодействии с антигеном. К их числу относятся прежде всего неполные антитела, а также некоторые другие антитела, относящиеся к группе гамма-А-глобулинов.
Способность антисыворотки преципитировать антиген может быть нарушена нагреванием до 65-70°, обработкой органическими растворителями, восстановлением в кислой среде. Феномен преципитации с антисывороткой, заведомо содержащей преципитины, возможен лишь при определенной температуре, концентрации солей и водородных ионов. Быстрее всего реакция П. протекает при 25-37°. Непременное условие образования преципитата - присутствие в изотонических концентрациях хлорида натрия (0,85% раствора NaCl). При увеличении концентрации NaCl до 15% преципитаты, образованные антигеном полисахаридной природы, частично растворяются, чем можно воспользоваться для извлечения чистых антител. Реакция преципитации с антигенами белковой природы протекает с одинаковой скоростью и полнотой как в 0,85%, так и в 15% растворах NaCl. Оптимальная для образования преципитата концентрация водородных ионов соответствует значениям рН от 5,0 до 9,0.
Обычно реакцию преципитации производят в пробирках с конусообразным концом. При получении мутных вытяжек реакцию преципитации производят в агаре по Оухтерлоню.

10. Биологические препараты, полученные методом генной инженерии

Из многих сотен препаратов, полученных методом генетической инженерии, в практику внедрена только часть: интерфероны, ин-терлейкины, фактор VIII, инсулин, гормон роста, тканевый активатор плазминогена, вакцина против гепатита В, моноклональ-ные антитела для предупреждения отторжения при пересадках почки, диагностические препараты для выявления ВИЧ и др.
Метод генетической инженерии относится к числу перспективнейших при получении многих белковых биологических веществ, представляющих ценность для медицины. В области создания биологически активных веществ медицинского назначения с помощью метода генетической инженерии исследования продолжаются на следующем этапе. Создаются препараты второго поколения, т. е. аналоги природных веществ, обладающих большей эффективностью действия.
Метод генетической инженерии является единственным при получении препаратов, если природный микроорганизм или животные и растительные клетки не культивируются в промышленных условиях.
Метод генетической инженерии предпочтительнее также в том случае, когда микроорганизм высоко патогенен и опасен при промышленном производстве.
Метод генетической инженерии используют в том случае, когда исходное сырье для получения препарата традиционным способом является дефицитным или дорогостоящим.
Метод генетической инженерии используется для получения принципиально новых продуктов и препаратов, не существующих в природе. Например, только с помощью генетической инженерии можно получить рекомбинантные поливалентные живые вакцины, несущие антигены нескольких микроорганизмов. Получен рекомбинантный штамм вируса оспенной вакцины, продуцирующий HBs-антиген вируса гепатита В, бешенства, клещевого энцефалита. Такие живые вакцины называют векторными.
Метод генетической инженерии позволяет также заменить многие методы, основанные на получении продуктов in vivo, на способы получения этих продуктов in vitro. До последнего времени диагностические, лечебные и профилактические сыворотки получали из крови иммунизированных лошадей или вакцинированных людей-доноров.
Многие фармакологические средства до сих пор получают путем переработки лекарственных трав. Для этого необходимо организовать сбор этих трав или выращивать их на плантации.
Биотехнология и генетическая инженерия позволяют получать эти же природные фармакологические вещества путем выращивания в промышленных условиях культур клеток лекарственных растений. В настоящее время налажен выпуск таким способом десятков лекарственных средств, среди них женьшень, строфантин и др.

Список использованной литературы

1. Приказ МЗ РФ № 309 от 21 октября 1997г. (с изм. и доп. от 24.04.2003) Инструкция по санитарному режиму аптечных организаций (аптек) // Новая аптека, № 10, 1998.
2. Асонов Н.Р. Микробиология. М.: КолосC,2007.
3. Волина Е.Г, Саруханова Л.Е. Основы общей микробиологии, иммунологии и вирусологии. М.: Медицина, 2004.
4. Воробьев А.Н. Микробиология. М., М-на, 2003.
5. Гусев М. В., Минеева Л. А. Микробиология. М.: Медицина, 2003.
6. Дукова В.С. Микробиология. Иммунология. Вирусология. Смоленск, Универсум, 2008.
7. Елинов Н. П. Химическая микробиология. М.: Медицина, 1989.
8. Емцев В.Т. Микробиология. М.Дрофа.2008.
9. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2001.
10. Подколзина В. А., Седов А. А. Медицинская микробиология. Конспект лекций. М.: Приор, 2005.
11. Поздеев О.К. Медицинская микробиология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.
12. Шуб Г. М. Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии. Саратов, 2001.


Скачиваний: 1
Просмотров: 1
Скачать реферат Заказать реферат